ブログ

Nov 14, 2023

長期にわたるミドリムシのレースウェイ栽培に関する新たな知見

Rapporti scientifici Volume 13,

Scientific Reports volume 13、記事番号: 7123 (2023) この記事を引用

577 アクセス

メトリクスの詳細

この研究は、開放池で長期間半連続的な窒素飢餓(N-)にさらされたときのユーグレナ・グラシリス(E. gracilis)の生理学的反応を調査することを目的とした。 結果は、N-条件（11 ± 3.3 gm-2 d-1）下のE. gracilisの増殖速度が、十分なN（N+、8.9 ± 2.8 gm-2 d-1）と比較して23％高いことを示しました。 ） 状態。 さらに、E.gracilis のパラミロン含有量は、N+ (7%) 条件と比較して、N- 条件では乾燥バイオマスの 40% (w/w) を超えていました。 興味深いことに、E. gracilis は、特定の時点以降、窒素濃度に関係なく同様の細胞数を示しました。 さらに、時間の経過とともに比較的小さい細胞サイズと、N-条件下で光合成装置が影響を受けないことが実証されました。 これらの発見は、E. gracilis が成長速度とパラミロン生産性を低下させることなく半連続的な N- 条件に適応するため、E. gracilis では細胞成長と光合成の間にトレードオフがあることを示唆しています。 注目すべきことに、著者の知る限り、これはN-条件下で野生型E. gracilis株による高いバイオマスと生成物の蓄積を報告した唯一の研究である。 この新たに同定された E. gracilis の長期適応能力は、遺伝子組み換え生物に依存せずに高い生産性を達成するための藻類産業に有望な方向性を与える可能性がある。

ユーグレナ・グラシリスは、原生生物科に属する単細胞の淡水運動性藻類で、1660 年代に発見されて以来 1、大きな注目を集めてきました。 E.gracilis は、色素体と葉緑体組織の独特な特性により、光合成機構と真核生物の細胞プロセスを理解するための重要なモデル生物です 2,3。 好気性の光条件下で、E. gracilis は光合成を行い、そのエネルギーを貯蔵多糖類、パラミロンとして知られる非分岐 β-1-3-グルカンの形で蓄えます 3,4。 嫌気性の暗所では、E. gracilis がパラミロンをワックスエステルに変換します。 これらは、飽和脂肪酸（C14:0 ミリスチン酸、C16:0 パルミチン酸、C18:0 ステアリン酸）とアルコール（ミリスチルアルコール）で構成される単鎖脂質です4。 E. gracilis とそのバイオ製品 (パラミロン、ワックスエステル) の応用は、食物繊維、糖尿病治療、腸内微生物叢の改善、栄養補助食品、バイオ燃料などのさまざまな分野で見られます5、6、7。 E. gracilis はその幅広い用途を考慮して、有望な産業用微細藻類として確立されています。 いくつかの藻類ベースの産業では、食品、ヘルスケア製品、バイオ燃料の大規模生産に藻類を使用しています3。

藻類産業は、低い操業コストで高いバイオマスおよびバイオ製品の生産性を達成するという継続的な課題に直面しています。 バイオ燃料生産、廃水処理、二酸化炭素回収、気候変動緩和などの分野において藻類には潜在的な利点がある一方で、藻類の生産性は依然として業界に対する長年の障壁となっている8、9、10。 環境条件と栄養素を調整すると、生物産物の形成が促進される可能性がありますが、多くの場合、バイオマスの生産性が低下します7。 E. gracilis の場合、パラミロンは貴重なバイオ製品とみなされます。 その蓄積は、栄養飢餓、高塩分、電気刺激、細菌との共培養、従属栄養培養などのさまざまな条件下で観察されています5、11、12、13、14、15、16。 研究者らはまた、E. gracilis の生産性とパラミロン含有量を改善するために遺伝子組み換えを試みています 17,18。 バイオマスやバイオ製品の生産を強化するこのような取り組みにもかかわらず、技術や環境への影響の点で常に高い代償を払わなければなりません。

窒素飢餓または窒素制限 (N-) は、E. gracilis における生物産物の蓄積を誘導するための費用対効果が高く、安全な治療法です 19。 この治療は、タンパク質から脂質やデンプンなどの貯蔵成分への（光合成で固定された）炭素の再循環を強化する代謝変化を引き起こし、エネルギー貯蔵メカニズムをもたらします20、21、22。 ただし、バイオマスの生産性は通常、対照条件と比較して N- 条件下で低下します 22、23、24。 バイオマスと脂質の生産性の両方を改善するために、中間添加、二段階、半連続、逐次窒素欠乏などのさまざまな窒素処理研究が実施されてきました25、26、27、28、29。 それにもかかわらず、このテーマはさらに解明される必要があります。 バッチ培養における 2 段階の窒素飢餓を使用したクロレラに関する最近の研究では、脂質に富む高バイオマスを維持する効率的な方法であることが証明されました 29。 E. gracilis については少数の研究しか行われておらず、窒素制限条件下では生物のバイオマス生産性が低下することが明らかになりました 29、30、31、32。 N 制限条件下で高いバイオマスとバイオ産物の蓄積の両方を達成することに成功した遺伝子組み換え菌株に関する研究はわずか数件しかありません 17,33。 しかし、バイオマスとバイオ製品の高い生産性を同時に達成するために窒素処理戦略の効率を改善するには、さらなる研究が必要です。

現在、E. gracilis が半連続的な N- 条件、特に長期間にわたってどのように反応するかについてはほとんどわかっていません。 また、E. gracilis を用いて自然環境下でそのような研究が行われた報告はありません。 産業における E. gracilis の重要性を考えると、安定した半連続栽培と高い生産性を達成するためには、E. gracilis が不可欠です 34。 これを考慮して、私たちの研究は、オープンレースウェイを使用した半連続N-条件下でのE. gracilisにおけるバイオ産物パラミロンの成長と蓄積を調査することを目的としました（図1a、b）。 この研究の結果は、大規模な商業生産のために E. gracilis を培養する方法として半連続 N 培養を使用する実現可能性を評価する上で貴重である可能性があります。

この研究では 1 m2 の栽培システムを使用しました。 (a) 池 R11 から R16 を示すレースウェイ池の設定。 R11、R14、および R15 は制御 (N が十分な、N +) 条件で維持され、R12、R13、および R16 は N 欠乏 (N-) 条件で維持されました。 ここで、定規の l、d、w は、池の壁内の池の長さ、幅、高さ (ミリメートル、mm) を表します。 画像は栽培1日目に撮影したものです。 (b) レースウェイ池の N+ および N- 培養物の比較図。 画像は実験の 5 日目に撮影されました。

4 か月の培養期間中、新しい種培養物を追加することなく、培養物を 16 週間維持することに成功しました。 実験は、2 日間窒素が利用可能で、その後 3 日間窒素欠乏が続く N- 条件で週 5 日のベースで実施されました。 N+条件下では、初期窒素の最大20〜60％が5日目までに消費されました（図2、補足図1A）。 N-池（R12、R13、およびR16）では、窒素は3日目までに完全に消費され、培養物は5日目までN-下で維持されました（補足図1A）。 N の消費量は、他の環境パラメータによっても変化するようです。 実験が 16 週間の終わりに近づくにつれて、気温と日射量は時間とともに変化しました。 雨の日と冬の初めには、平均日射量と平均気温の低下が観察されました（図2）。 これは、窒素消費相関データにも反映されました（補足図1B）。 N 利用率は、日射量 (r = 0.3) と温度 (r = 0.4) の間に中程度の正の相関関係を示しました。 さらに、日射量と気温の間には適度な正の相関関係も観察されましたが、時間とともに負の相関関係が見られました。

窒素が十分な（N + ）状態、毎日の気温、日射量からの平均窒素含有量。 黒、灰色、破線はそれぞれ、N+ 池からの日射量 (MJ m-2 day-1)、日平均気温 (°C)、および N 含有量 (mg L-1) を表します。

N- 条件での成長率は、N+ 条件よりも高かった (23%) (図 3a)。 毎週の平均成長率は、N- 条件では 10 ～ 14 gm-2 d-1、N+ 条件では 6 ～ 12 gm-2 d-1 でした。 N+およびN-条件での実験全体にわたる毎週の培養の平均増殖速度は、それぞれ8.9±2.8gm-2d-1、および11±3.3gm-2d-1であった。 統計分析から、1 日目の増殖率データには有意差はなく、p 値は 1 日目 (G-DF: 増殖データ フレーム、G-DF1) から 4 日目 (G -DF2) (表 1、補足図 2A)。 2 つの条件間では、5 日目 (G-DF3) までに増殖速度の有意な差が観察できます (表 1、補足図 2B)。 条件間の成長パフォーマンスには明らかな違いがありました（補足図3A、B）。 4 か月間にわたって、N+ 条件の細胞数は最初は N- 条件よりも高かったが、その差は時間の経過とともに徐々に減少しました。 10週目までに、両方の条件の細胞数は同様であるように見えました（図3b、補足図4A）。

十分な窒素（N +）および窒素飢餓（N-）下での E. gracilis の増殖特性。 (a) N+ と N- の間の週平均成長率の比較。 (b) 細胞数、および (c) 毎週の半連続 N- 実験の各週の終わりにおける細胞直径。 白丸はN-条件下で増殖した細胞を示し、黒丸はN+条件下で増殖した細胞を示す。 黒のアスタリスクは、成長率が低い時期を示します。 赤い星印は、細胞数、直径、パラミロンが測定されなかった週を示します。 各測定のエラーバーは、3 つの池 (n = 3) にわたる各処理 (N+ および N-) の平均値の標準偏差を示します。

一方、セル直径は、直径データフレーム D-DF2 と D-DF3 で大きく異なりました (表 1)。 N - 条件の細胞直径は、最初の数週間は N + と同様でしたが、その後は N + 細胞よりも小さくなったように見えました（図3c、補足図4B）。 細胞直径の変化のパターンは、毎週の実験の3日目から5日目まで異なるようでした（補足図4B）。 両方の条件 (N+ および N-) で増殖した細胞の直径は、14 条件で週ごとに進行するにつれて、相互 (r = 0.7) および時間 (それぞれ r = 0.3 および r = 0.0) と正の相関関係がありました。週の実験（補足図4C）。 さらに、N+およびN-条件の細胞直径は、毎週の実験内で日ご​​とに進行するため、温度（それぞれr = - 0.4およびr = - 0.1）および時間（r = - 0.2およびr = -）と負の相関があります。それぞれ0.1）（補足図4C）。

全体的な結果は、N-条件下での細胞直径が最初の数週間よりわずかに減少し、N+細胞直径よりも比較的小さいことを示しています。 それにもかかわらず、実験全体を通じて平均細胞数 (N+ の場合は 0.6 ± 0.1 × 106、N- の場合は 0.6 ± 0.0 × 106 細胞 mL-1) および直径 (N+ の場合は 14.2 ± 0.7 μm、N- の場合は 13.8 ± 0.6 μm) は次のとおりでした。 N+ 条件では N- 条件よりも高くなります（補足図 4D）。 日射量と温度が低い場合、両方の条件で E. gracilis の増殖の同様の減少が観察されました (図 2)。

この研究では、窒素の利用可能性に応じたクロロフィル (Chl) の蛍光と光合成効率を評価しました。 結果は、総クロロフィル含有量（Chl a + b）が、N+条件と比較してN-条件下でわずかに低いことを示しました（図1b、4a）。 ただし、暗所でのインキュベーションの前後のクロロフィル-a（Chl-a）組成とQy応答パターンは、両方の条件で同様でした（図4b〜d）。 さらに、4 つの測定値すべてに対する ANOVA 分析では、2 つの条件間に有意差がないことが示されました (p > 0.05)。

十分な窒素 (N +) および窒素欠乏 (N-) 条件下で生育した E. gracilis のクロロフィルおよび光合成活性。 (a) 培養の最後の週 (第 16 週) に測定された総クロロフィル (Chl) 含有量 (Chl a + b)。 (b) 総クロロフィル含有量中に存在するクロロフィル a (Chl-a) の割合 (%)。 光合成量子収量（Qy）は、（c）前と（d）1時間の暗所インキュベーション後に測定されました。 白丸は N- 条件を表し、黒丸は N+ 条件を表します。 エラーバーは、3 つの池 (n = 3) にわたる各処理 (N+ および N-) の平均値の標準偏差を示します。

結果は、パラミロン含有量がN+条件と比較してN-条件で高いことを示しました（図5a）。 パラミロンの蓄積は、N- 条件では乾燥細胞重量の 21.0 ～ 55.0% の範囲でしたが、N+ 条件では 5.0 ～ 10.0% であることが観察されました。 平均して、41.0 ± 13.5% (328.8 ± 182.9 pg cell-1) のパラミロンが N- 条件下で蓄積されましたが、N+ 条件下では 7.7 ± 3.0% (49.7 ± 23.3 pg cell-1) のみが蓄積されました。 パラミロンの蓄積も、細胞内の小さな顆粒体として顕微鏡下で観察されました（図5b）。

パラミロンと粒子の元素組成。 (a) N 十分 (N +) および N 欠乏 (N-) 条件下で培養された E. gracilis におけるパラミロン % (乾燥バイオマスの w/w %) として表される総炭水化物含有量のパーセンテージ。 パラミロン含量は、第 6 週を除く半連続培養実験の各週の最終日に測定されました。エラーバーは、3 つの池にわたる各処理 (N+ および N-) のパラミロン含量の平均値の標準偏差を示します ( n = 3)。 (b) 明視野および暗視野下で N+ および N- 条件で成長させた E. gracilis の顕微鏡観察。 パラミロン体は、明るい視野では小さな透明な体、暗い視野では赤い楕円形の体として見えます。 （ c ）3週間のそれぞれの最終日に、各処理（N +およびN - ）ごとに1つの池から採取した3週間のサンプルの平均として測定された全有機炭素（TOC）および窒素（TN）の割合。 エラーバーは、3 週間にわたる各治療の TOC および TN 測定値の平均値の標準偏差を示します (n = 3)。 灰色のバーは N- 状態を示し、黒色のバーは N+ 状態を示します。

全窒素（TN）および全炭素（TC）の含有量も、N-条件とN+条件で異なることがわかりました（図5c）。 5 日目には、N- 条件 (5.3 ± 1.2%) と比較して、N+ 条件 (10.0 ± 0.5%) の細胞でより高い窒素含有量が観察されました。 対照的に、5 日目の無細胞培地の平均 N 含量は、N- 条件では約 0 mg L-1、N+ 条件では 44.8 ± 13.6 mg L-1 の検出レベルを下回っており、比率が高いことを示しています。 N+ 条件と比較した N- の培地に対する細胞内の窒素の量。

毎週の実験の終わりまでに、N+ 細胞にはほぼ 48.0 ± 2.0% の炭素が存在し、N- 細胞には 46.0 ± 2.0% が存在することが判明しました。 細胞あたりの総炭素含有量は、N- 条件では 0.4 ± 0.1 ng cell-1、N+ 条件では 0.3 ± 0.0 ng cell-1 でした。 全体として、この結果は、窒素の利用可能性がパラミロンの蓄積と細胞内の粒子状物質の組成に影響を与えることを示唆しています。

この研究では、N+ 条件と比較して N- 条件で 23% 高い成長速度が観察されました。これは炭素固定の違いだけでは説明できません。 細胞反応は時間とともに変化しました。 結果から、実験の最初の 3 日間、両方の条件の細胞が N が十分な条件下で活発に増殖し、すべてのタンクで同様の初期バイオマス濃度があったことが明らかでした。 したがって、G-DF1 および G-DF2 テストでは有意な差は観察されませんでした。 ただし、すべての日の増殖速度 (G-DF3) は、N+ 条件と N- 条件の間で顕著なコントラストを示し、p 値は 0.05 未満であり、N- 条件の方が高い増殖速度を示しています。 N- 条件の平均セル サイズも N+ 条件よりも小さく、これは D-DF2 および D-DF3 テストに反映され、p 値は 0.05 未満でした。 細胞サイズの傾向は、他の藻類属のセネデスムス属およびロドモナス属、さらにはアンキストロデスムス・ファルカトゥスやステファノディスカス・ミヌルラスなどの種に関する以前の報告と一致しています19,35。 興味深いことに、相関分析により、細胞サイズの減少は短い培養期間中にN+およびN-条件の両方で発生することが示されましたが、N-条件ではより顕著であるようです。 さらに、長期間の培養では、細胞のサイズと数は、窒素利用可能性以外にも温度などの環境要因の影響を受ける可能性があります。 現在の研究では、環境温度が低いと、両方の条件下で増殖速度が低下し、細胞体積が増加することが判明しました。 我々の結果は、E. gracilis が低温での原形質増殖と高温での細胞分裂を好むことを示す以前の研究と一致しています 36。 しかし、N-条件におけるセルサイズに対する温度の影響は最小限であると思われ、これまで報告されていませんでした。 N- 条件の E. gracilis は、最初は N+ 条件と比較して細胞数が少なく、同様の直径を示しましたが、数週間後には、より小さな直径でより多くの細胞数が観察され、半連続 N- 条件での長期培養が細胞数を調節することを示唆しています。 E.グラシリスの生理学。 窒素条件では、E. gracilis は窒素の利用可能量が短期間で劇的に変化する環境に適応する必要がありました。 細胞は、3 日間の窒素欠乏に先立つ 4 日間の十分な窒素供給により、最初は急速に増殖しますが、その後、エネルギーを蓄えるために生化学的変化を受けます 29。 E. gracilis は N- 条件での N-獲得の周期的プロセスに順応することができ、その結果、N+ 条件と比較してより高い増殖速度をもたらすようです。 培養は開放池で行われたため、N+ 培養物と N- 培養物の両方の環境条件は類似しており、観察された成長とバイオマスの違いは主に窒素の利用可能量によるものでした。

N- 条件下では、細胞サイズが小さいほどタンパク質含有量が低いことが示唆され 19、炭素プールは炭水化物または脂質の合成に向けられる 23、24、25。 私たちの研究では、N-条件下で高い（> 40%）パラミロン含有量が観察されました。これは、エネルギー保存のために炭素がパラミロンに固定されており、その結果細胞密度が増加していることを示しています。 一方、N+ 条件下の E. gracilis は、固定炭素を利用して細胞分裂のためのエネルギーを生成するため、細胞数は多くなりますが、細胞密度は低くなります。 これは、最初の数週間の 2 つの条件間の細胞数とバイオマスの違いから明らかです。 しかし、時間の経過とともに、細胞数はどちらの条件でも同様でしたが、バイオマスは N- 条件の方が高いままでした。 これは、固定炭素を利用してパラミロンを蓄積しながら増殖できるという E. gracilis の順化の考えをさらに裏付けています。

さらに、現在の結果は、細胞当たりの炭素含有量が、N+ 条件下 (0.27 ng cell-1) よりも N- 条件下 (0.42 ng cell-1) の方がほぼ 1.5 倍高かったことを示しています。 観察された細胞あたりの炭素含有量の増加は、おそらく光合成による炭素固定の増加によるものである可能性があります。 興味深いことに、N-飢餓にもかかわらず、総クロロフィル含有量に有意な差がなかった。 しかし、N- 培養物のグラフと色から、クロロフィル含有量がわずかに減少していることが示唆されます。 通常、これらの条件下では、一部の葉緑体タンパク質が優先的に失われ、最終的に光合成プロセスのバランスが保たれるため、クロロフィル含有量が減少します37。 さらに、暗所でのインキュベーションの前後で量子収量に有意な差はなかったので、N+ および N- 培養物の両方が光合成中に光エネルギーを化学エネルギーに変換する効率が同等であると推測できます。 しかし、結果は、N-培養物がより高い成長速度とパラミロン生産をサポートできることを示しており、これらの培養物の光合成装置がより効率的であり、N飢餓に対処するように適応していることを示唆しています。 N 制限条件下の微細藻類は、色素沈着が低く、光合成効率が高いという仮説が以前から立てられていました 38。 これは、最大量子収量が N 欠乏下でも影響を受けなかったヒマワリ植物でも観察されました 39。 さらに、一部の海藻では複数の C 固定経路 (C3、C4、または CAM) 経路が共存することが証明されています 40,41。 中でも、CAM 経路はストレス条件下で植物の光合成を維持する上で重要な役割を果たし、夜間に炭素を固定することができます。 CAM 経路関連代謝産物は E. gracilis の化学ストレスによって刺激されることが以前に報告されており、その存在が示されています。 したがって、長期間の半連続的な窒素飢餓下でのCAM経路の活性化は、E. gracilisの活発な光合成活性とC固定の増加に寄与する可能性があります。

N-条件下でのScenedesmus obliquus変異体（SO120G）に関する最近の研究でも、増殖と生成物収量における同様の結果が観察されました33。 SO120G33の場合とは異なり、今回の研究におけるクロロフィル含有量は対照よりも高くはありませんでした。 SO120Gにおけるこのような応答は、シトクロムb6/f複合体(Pet B)および光合成電子伝達担体(Pet J)に関連する遺伝子の上方制御の結果であることが明らかになった。 これらのタンパク質は、光化学系 II から光化学系 I への電子移動および周期的な電子輸送を仲介し、光合成効率を向上させます。 E. gracilis では、petB は陸上植物と同様に葉緑体ゲノム内のオペロン複合体 petB-atpB-atpE の一部として同定されました 42。 この遺伝子の活性化は、細胞および産物形成のための ATP 合成に不可欠な ATP 合成酵素複合体の発現も誘導します。 Chl含有量のわずかな減少により、培養物への光透過効率が改善され、ひいては産物形成が改善された可能性もあります。 栄養飢餓の最初の数時間では、生成物の形成速度が急速に誘導され、その後徐々に減少します43。 この過剰な光は、N 欠乏条件下での生成物の形成に必要なエネルギーを供給する可能性があります 44。

N- 条件での高い成長とは対照的に、N+ 条件下での成長率が低いことも、バイオマスの生産性を理解する上で重要な結果です。 多くの微細藻類種はアンモニウムの形の窒素を好み、成長培地中の高濃度のアンモニウムは藻類の NH4+ イオンの吸収を高めます。 しかし、これは過剰な NH4 フラックスをもたらし、ATP 形成と光合成の制御を妨げる可能性があります 45。 これはアンモニウム中毒を引き起こす可能性があり、アンモニウムからアミノ酸への変換速度が細胞への流入よりも遅くなり、N+ 条件下での増殖速度が低下します 46。 さらに、これには pH の低下が伴い、藻類による CO2 固定の効率が低下します。 この研究では、N+ 条件と N- 条件の両方で pH が一貫して 2.3 ～ 2.5 に維持され、細胞は活発な増殖を示しているように見え、アンモニア中毒がないことが示されました。

この研究の結果は、この栽培方法が E. gracilis の収量を向上させることができることを示唆しています。 これは藻類栽培の経済的実行可能性にとって重要な考慮事項です。 この方法は、栄養素の投入コストも削減します。 さらに、産業栄養廃棄物、有機廃棄物の嫌気性消化物、発電所からの排出 CO2 と組み合わせてこの技術を使用して E. gracilis を栽培することは、循環経済を促進し、清潔で持続可能な環境に貢献する可能性があります9,47。 さらに、このアプローチは他の微細藻類にも適用され、バイオ燃料や他のバイオ製品の持続可能な供給源を提供する可能性があります。

ただし、開放池栽培にはいくつかの制限があります9。 安定した栽培システムを年間を通じて維持することは、温暖な気温や十分な日照などの好ましい気象条件に依存し、特定の地理的地域に限定されるため、困難です。 この研究では、光強度、温度、窒素消費量などの生育条件の間に時間の経過に伴う相関関係が観察され、季節変動の影響が示されました。 開放池システムは細菌や他の藻類などの他の微生物による汚染にも弱いため、頻繁な汚染チェックが必要です。 この研究では、pH が 2.5 未満に維持されている場合、汚染は重大ではありませんでした。 さらに、開放池の高温は蒸発による水の損失を引き起こし、生産性の低下につながる可能性があります。 したがって、最適な生産性を確保するには、池の水位を定期的に監視し、維持する必要があります。 したがって、開放池栽培の可能性にもかかわらず、商業生産用の藻類栽培システムを設計する際には、これらの制限を考慮することが重要です。

結論として、この研究は、E. gracilis が長期間の N- 条件下でこれまで観察されていなかった独特の適応メカニズムを持っていることを実証しました。 その結果、細胞数が徐々に増加し、対照条件と比較して細胞サイズが小さくなり、光合成活性が影響を受けていないことが示されました。 これらのユニークな観察に寄与する制御機構を理解するには、さらなるオミクス研究が必要です。 この研究の結果は、野生型株のみを使用した E. gracilis とパラミロンの工業規模の生産に有望な意味を持ちます。 半連続的な低栄養の露地栽培を採用することができ、これによりバイオマスと製品収量が増加しながら運営コストが削減されます。

実験には株式会社ユーグレナ（東京、日本）で飼育されているE. gracilisを使用した。 種子のスケールアップを含むすべての実験は、窒素 (N) 源として硫酸アンモニウム ((NH4)2SO4) を 70 mg L-1 の濃度で含む Cramer Myers 培地 (CM 培地)1,28 を使用して実施されました。 最初に、2 L の種培養物をストック培養物から調製し、その後実験室で 30 L にスケールアップしました。 種培養の温度、通気、および光強度は、それぞれ30℃、0.01 vv-1 min-1 (10% CO2)および800 μmol m-2 s-1 (蛍光灯による連続照明)に維持されました。 この培養は、1 m 2 から始まり、50 m 2、500 m 2 と増加し、最終的には 1000 m 2 のレースウェイ池まで、オープンポンドでさらにスケールアップされました。 スケールアップの各ステップには約 7 日かかりました。 主な実験の前に、1000 m2 のレースウェイ培養を、新鮮な CM 培地を毎週添加しながら 4 か月間半連続的に維持しました。

この研究は、2022 年 7 月から 2022 年 10 月まで、6 つの 1 m2 タンク (R11、R12、R13、R14、R15、R16) を使用して実施されました。 藻類培養物は、次のサイクルまで十分な増殖を可能にするために、5 日間の実験段階とそれに続く 2 日間の維持段階を含む、週 1 サイクルで半連続的に増殖させました。 3 つのタンク (R11、R14、および R15) では、培養物は十分な窒素 (N +) レベルの制御条件下にあり、R12、R13、および R16 の他の 3 つのタンクは窒素飢餓 (N-) 条件下にありました (図 1)。 。 窒素飢餓培養プロセスでは、毎週 3 日目から 5 日目まで培養物を N- 条件にさらし、残りの日は N+ 条件下に維持しました。

各週の実験の開始時（1日目）に、各1 m2の池の初期バイオマス濃度を約50 gm-2に調整し、続いてN 源を含まない必要なCM培地を添加しました。 次いで、池を底から２００ｍｍの高さまで水道水で満たした（総量１７０Ｌ）。 N+ 池の場合、(NH4)2SO4 を N 源として約 65 mg L-1 の濃度で添加しました。 N- 池の場合、初期アンモニウム N 濃度は 4 ～ 8 mg L-1 に設定され、各サイクルの最初の 2 日間は 2 mg L-1 以上に維持されました。 最初の 2 日後、培養液中の N は細胞によって完全に消費され、検出レベル (0 mg L-1) 未満に達しました。 次いで、池をN-条件下で次の3日間放置した。 サンプリング後 5 日目に、15 ～ 30 mg L-1 (NH4)2SO4 を N- 池に添加して、次のサイクルまで 2 日間アンモニウム-N 濃度を 2 mg L-1 以上に維持しました。 実験開始前に細胞が窒素飢餓に陥るのを防ぐために、窒素飢餓ステップまで (NH4)2SO4 レベルを監視し維持することが重要です。 その後の数日間、天気予報 (気温、曇り、降雨量) を注意深く監視し、それに応じて必要量の (NH4)2SO4 を添加し、N- 池で 3 日目までに N-飢餓を達成しました。 翌週も同じサイクルを繰り返しました。 このサイクルは、2022 年 10 月末まで毎週繰り返されました。さらに、培養液の混合は、2 つのオーダーメイド外輪を 75 rpm で回転させることによって維持されました。 10% CO2 の曝気を 0.01 vv-1 min-1 の速度ですべての池に供給し、pH を 2 ～ 2.5 に維持しました。

すべての池のバイオマス (乾燥細胞重量)、細胞数、サイズ、および NH4-N 含有量を測定するために、毎日 17:00 にサンプリングを実施しました。 毎週の実験の 2 日目と最終日ごとに、15:00 に 1.5 L の培養物を採取し、凍結乾燥して粉末サンプルを作成しました。

細胞の生理機能と汚染は、OLYMPUS CX-41 正立顕微鏡を使用して毎日評価されました。 細胞数と体積は、Sysmex システム パーティクルカウンター CDA-1000 (Sysmex corp.、兵庫県、日本) を使用して測定しました。

ガラス繊維フィルター (直径 47 mm、孔径 ADVANTEC、東洋濾紙株式会社、東京、日本) をオーブン中 100 °C で 2 時間乾燥し、冷却後に重量を測定しました。 10 ミリリットルのサンプルをフィルターで濾過し、10 mL の蒸留水 (Dw) で 3 回リンス (または洗浄) しました。 (すべてのろ過ステップは穏やかな真空吸引で実行されました。) 湿ったフィルターは重量を量る前に 100 °C で 2 時間乾燥させました。 バイオマス生産性は、成長率と比成長率によって測定され、次のように計算されました。

ここで、DMi は ti 日目の乾燥重量 (OR 質量)、v はサンプル量 (10 mL) を表します。 ３回の測定値を平均した。

パラミロン濃度は、小川らに従って決定されました。 観察結果は、回折格子ベースの吸光度リーダー SH-1300Lab (コロナ電気株式会社、茨城県、日本) を使用して測定されました。

毎日の光子束は光子束ロガー (エコ光子センサー ML-020P、EKO、日本) を使用して記録され、池の水温は温度ロガー (サーモレコーダー TR-52i、T&D Corporation、日本) を使用して記録されました。

全クロロフィル抽出は、100% メタノールを使用して 1 ml の E. gracilis 培養ペレットから行われました [Toyama et al., 2019]。 吸光度の測定には、UVmini-1240 分光光度計 (島津製作所、京都、日本) を使用しました。 総クロロフィル (Chl a + b、μg mL-1) 含有量は次のように計算されました 48。

ここで、A665 と A650 は、それぞれ 665 nm と 650 nm の波長での吸光度を表します。

さらに、半連続的な栄養飢餓が光合成活性に及ぼす影響を理解するために、量子収量（Qy または Fv/Fm）を測定しました。 光合成効率（Qy）は、AquaPen E-AP 110-C（日本環境測定株式会社、日本）を使用して測定しました。 それぞれ 10 ml の 2 つの新鮮なサンプルを各池から収集しました。 1 つのサンプルはアルミホイルで包み、Qy 測定前に 1 時間暗所に保管し、もう 1 つのサンプルはサンプリング直後に測定しました。 Chl含有量と光合成効率の両方が、実験全体の最後の2週間に測定されました。

全炭素 (TC) および全窒素 (TN) 含有量は、日本の住化分析サービス株式会社によって分析されました。 ３回の連続した週次実験（第１週から第３週）から５日目（Ｎ－条件の最終日）に収集した乾燥Ｅ．グラシリスサンプルを測定に使用した。 このデータの平均は、各サイクルの終了時に細胞内で利用可能な最大の C および N 含有量とみなされました。 培地中のNH4-Nは、1mlの細胞懸濁液からの無細胞培地を使用して測定した。 まず、サンプルを高速ミニ遠心機 (GUSTO® HIGH-SPEED MINI CENTRIFUGE、HEA10050、イリノイ州、米国) を使用して 10,000 rpm で 1.5 分間遠心分離し、得られた上清を使用して Digital Pack を使用して NH4-N 含有量を測定しました。テストマルチSP：DPM-MTSP（共立化学チェック研究所株式会社、日本）。

R-studio バージョン 4.2.1 ソフトウェアを使用して、N- 条件と N+ 条件の間の違いを評価するために統計分析を実施しました。 成長率 (G) および直径 (D) データは、データ フレーム (DF) と呼ばれる 3 つの異なるグループ (DF1、DF2、および DF3) に分割されました。 DF1 は 1 日目のみの全週間データを表し、DF2 は 3 ～ 5 日目のデータを表し、DF3 は 5 日間すべてのデータを表します。 一元配置分散分析を、G-DF および D-DF のそれぞれ、クロロフィル含量、および Qy に対して実行しました。 すべてのテストの有意水準は 0.05 に設定されました。 成長率については、1 日目は (1) の式に従って 2 日目と 1 日目の差として計算され、3 ～ 5 日目も同様に計算されました。 細胞の直径については、日数は実際のタイムラインを表します。 さらに、太陽放射、温度、時間 (日および週) と細胞内の N 含有量、N+ 細胞直径、N- 細胞直径などの変数との相関関係を調べるピアソン相関分析も実行されました。

すべてのデータは、図、表、および補足データとして原稿に提供されます。

レーン、N. 目に見えない世界: レーウェンフックの考察 (1677) 小動物について。 フィロス。 トランス。 R. Soc. ロンド。 Bバイオル。 科学。 370、20140344 (2015)。

Johnson, LP E. gracilis 属の分類、系統発生、および進化。 『E. gracilis の生物学』 (Buetow DE 編) 1 ～ 25 (Academic Press Inc.、1968)。

鈴木和也：ミドリムシの大規模栽培。 上級経験値医学。 バイオル。 979、285–293 (2017)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Goldemberg, SH & Marechal, LR ユーグレナ・グラシリスにおけるパラミロンの生合成。 ビオチム。 生物物理学。 Acta 71、743–744 (1963)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

遠山 徹 ほか微細藻類の成長促進細菌 Emticicia sp. との共培養によるユーグレナ グラシリスによるバイオマスと脂質の生産の強化 EG3。 バイオテクノロジー。 バイオ燃料 12、205。https://doi.org/10.1186/s13068-019-1544-2 (2019)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kottuparambil、S.、Thankamony、RL & Agusti、S. 付加価値代謝物の潜在的な天然源としてのナス。 藻類研究 37、154–159 (2019)。

記事 Google Scholar

Gissibl, A.、Sun, A.、Care, A.、Nevalainen, H. & Sunna, A. ユーグレナ グラシリスからのバイオ製品: 合成と応用。 フロント。 バイオエンジ。 バイオテクノロジー。 7、108。 https://doi.org/10.3389/fbioe.2019.00108 (2019)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

イギリス、レイテ、アブデルアジズ、AE & ハレンベック、PC 藻類バイオ燃料: 課題と機会。 バイオリソース。 テクノロジー。 145、134–141 (2013)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

サーワー、A.ら。 バイオ燃料生産と炭素隔離のための藻類バイオマスの価値評価: レビュー。 環境。 化学。 レット。 20、2797–2851 (2022)。

記事 CAS Google Scholar

Khan, MI、Shin, JH & Kim, JD 微細藻類の有望な未来: バイオ燃料、飼料、その他の製品の持続可能で再生可能な産業の現状、課題、最適化。 微生物。 細胞の事実。 17、36。https://doi.org/10.1186/s12934-018-0879-x (2018)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Jeon、MS et al. Pseudoalteromonas sp.との共培養によるユーグレナ・グラシリスの成長とパラミロン生産の促進 MEBiC 03485. バイオリソース。 テクノロジー。 288、121513。https://doi.org/10.1016/j.biortech.2019.121513 (2019)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Kim, JY, Oh, JJ, Jeon, MS, Kim, GH & Choi, YE インドール-3-酢酸生産菌ビブリオ・ナトリジェンスとの共培養戦略によるユーグレナ・グラシリス・パラミロン生産の改善。 応用環境。 微生物。 85、e01548-19。 https://doi.org/10.1128/AEM.01548-19 (2019)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Ouyang, Y. et al. 世界的なメタボロミクスにより、ビブリオ・ナトリジェンスがユーグレナ・グラシリスの成長とパラミロン合成を促進することが明らかになりました。 フロント。 バイオエンジ。 バイオテクノロジー。 9、652021。https://doi.org/10.3389/fbioe.2021.652021 (2021)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

カンナ、SD 他塩ストレスは、ユーグレナ グラシリス細胞におけるパラミロンの蓄積とチラコイド膜のマクロ組織化の微調整を誘導します。 フロント。 植物科学。 12、725699。 https://doi.org/10.3389/fpls.2021.725699 (2021)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

キム、JY 他ユーグレナ・グラシリスに電気処理を施すことでパラミロンの生産量を増加させます。 応用微生物。 バイオテクノロジー。 105、1031–1039 (2021)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

ファン、P. 他パラミロン生産のための微細藻類ユーグレナ・ピシフォルミスAEW501の混合栄養培養の最適化。 3月 麻薬。 20, 518。 https://doi.org/10.3390/md20080518 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

小川 達也 ほかシアノバクテリアのフルクトース-1,6-/セドヘプツロース-1,7-ビスホスファターゼの発現によるユーグレナ・グラシリスの光合成能力の増強は、バイオマスとワックスエステルの生産量の増加につながります。 バイオテクノロジー。 バイオ燃料 30、8–80 (2015)。

Google スカラー

原田理、野村哲、山田和、持田和、鈴木和 ユーグレナ・グラシリスの遺伝子工学戦略と持続可能な開発目標への産業的貢献：総説。 フロント。 バイオエンジ。 バイオテクノロジー。 8, 790 (2020)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Latsos, C.、Van Houcke, J. & Timmermans, KR バイオマス収量およびロドモナス種の生化学成分に対する窒素飢餓の影響。フロント。 3月科学。 7、563333。 https://doi.org/10.3389/fmars.2020.56333 (2020)。

記事 Google Scholar

Tan, KWM & Lee, YK 緑色微細藻類の脂質生産性に関するジレンマ: 成長を犠牲にすることなく油収量を向上させるには基質を提供することの重要性。 バイオテクノロジー。 バイオ燃料 9、255。https://doi.org/10.1186/s13068-016-0671-2 (2016)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bakku、RK et al. 窒素制限下でのアルケノンおよび脂質の蓄積の変化、およびハプト藻藻類 Emiliania huxleyi CCMP 2090 における他のエネルギー貯蔵代謝産物との関係。J. Appl. フィコル。 30、23–36 (2018)。

記事 CAS Google Scholar

Dragone, G.、Fernandes, BD、Abreu, AP、Vicente, AA & Teixeira, JA 微細藻類におけるデンプン蓄積を増加させるための戦略としての栄養素制限。 応用エネルギー 88、3331–3335 (2011)。

記事 CAS Google Scholar

Jia、J.ら。 窒素枯渇条件下におけるナンノクロロプシス・オセアニカにおける光合成炭素が貯蔵中性脂質に分配される分子機構藻類研究 7、66–77 (2015)。

記事 ADS Google Scholar

Tan, K. et al. Dunaliella tertiolecta における窒素誘発代謝変化と炭素配分の分子決定因子。 科学。 議員 6、37235。https://doi.org/10.1038/srep37235 (2016)。

論文 ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Bona, F.、Capuzzo, A.、Francino, M. & Maffei, ME ネオクロリス・オレオアバンダンスにおける脂肪酸生産を最大化するための便利な操作戦略としての半連続的窒素制限。 藻類研究 5、1–6 (2014)。

記事 Google Scholar

Ördög, V.、Stirk, WBA、Bálint, P.、van Staden, J. & Lovász, C. 窒素ストレスを受けた Chlorella minutissima 培養物における脂質、タンパク質、色素濃度の変化。 Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｃｏｌ． 24、907–914 (2012)。

記事 Google Scholar

Nagappan, S.、Devendran, S.、Tsai, PC、Dahms, HU & Ponnusamy, VK 微細藻類バイオ燃料生産における 2 段階培養の可能性。 燃料 252、339–349 (2019)。

記事 CAS Google Scholar

パンチャ、I.ら。 窒素ストレスは微細藻類Scenedesmus sp.の生化学的および形態学的変化を引き起こした。 CCNM 1077. バイオリソース。 テクノロジー。 156、146–154 (2014)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Liu, T. et al. 油性微細藻類クロレラ・ブルガリスにおける窒素ストレスによって引き起こされる生化学的および形態学的変化。 微生物 10、566。https://doi.org/10.3390/microorganisms10030566 (2022)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

García-Ferris, C.、De Los Rios, A.、Ascaso, C. & Moreno, J. 窒素欠乏状態のミドリムシにおける相関する生化学的および超微細構造変化。 Ｊ．Ｐｈｙｃｏｌ． 32、953–963 (1996)。

トッサヴァイネン、M. 他光従属栄養培養物におけるユーグレナ・グラシリスの脂質、タンパク質および色素生成に対する長期窒素制限の影響。 PeerJ 7、e6624。 https://doi.org/10.7717/peerj.6624 (2019)。

論文 CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

彼、J.ら。 モデル緑色微細藻類ユーグレナ・グラシリスのさまざまな環境ストレスに対する代謝応答。 フロント。 バイオエンジ。 バイオテクノロジー。 9、66265。https://doi.org/10.3389/fbioe.2021.66265 (2021)。

記事 Google Scholar

鈴木和也 ほかミドリムシ アナベナ 変種の選択と特性評価ミドリムシの新たな産業利用候補種としてはマイナーである。 生物科学。 バイオテクノロジー。 生化学。 79、1730–1736 (2015)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Xi、Y.ら。 光合成効率と脂質生産性が向上したScenedesmus obliqnus変異体の特性評価とRNA-seqトランスクリプトーム解析。 科学。 議員 11、11795。https://doi.org/10.1038/s41598-021-88954-6 (2021)。

論文 ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kilham、SS、Kreeger、DA、Goulden、CE、Lynn、SG ファルカトゥスの生化学成分に対する栄養制限の影響。 フレッシュw。 バイオル。 38、591–596 (1997)。

記事 CAS Google Scholar

Buetow, D. ユーグレナ グラシリスにおける温度と酸素摂取量との線形関係。 ネイチャー 199、196–197 (1963)。

論文 ADS CAS PubMed Google Scholar

Coleman, LW、Rosen, BH & Schwartzbach, SD 窒素欠乏ユーグレナにおける葉緑体タンパク質の優先的損失。 植物。 細胞生理学。 29、1007–1014 (1988)。

CAS Google スカラー

Guido Breuer、DEM、Draaisma、RB、Wijffels、RH & Lamers、PP 窒素欠乏状態のScenedesmus obliquusにおける光合成効率と炭素分配。 藻類研究バイオマス バイオ燃料 Bioprod. 9、254–262 (2015)。

Google スカラー

Ciompi, S.、Gentili, E.、Guidi, L. & Soldatini, GF ヒマワリの葉のガス交換およびクロロフィル蛍光パラメーターに対する窒素欠乏の影響。 植物科学。 118、177–184 (1996)。

記事 CAS Google Scholar

Xu、J.ら。 緑潮を形成する藻類アオサ増殖における C3 および C4 光合成経路の共存の証拠。 PLoS ONE 7、e37438。 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0037438 (2012)。

論文 ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cheng, J.、Zhu, Y.、Zhang, Z. & Yang, W. 発電所の石炭燃焼排ガスからの CO2 固定を強化するための微細藻類株の改変と改良。 バイオリソース。 テクノロジー。 291、121850。https://doi.org/10.1016/j.biortech.2019.121850 (2019)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Hon, L. & Hallick, RB シトクロム b6 と H (+)-ATP シンターゼ複合体のベータおよびイプシロン サブユニットをコードする新規ユーグレナ グラシリス葉緑体オペロンの遺伝子構造と発現。 カー。 ジュネット。 25、270–281 (1994)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

サン、Ｈら。 微細藻類生産プラットフォームからの高価値バイオマス: 炭素代謝とエネルギー変換に基づく戦略と進歩。 バイオテクノロジー。 バイオ燃料 11、227。https://doi.org/10.1186/s13068-018-1225-6 (2018)。

論文 ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

ロドルフィ、L.ら。 油用微細藻類: 株の選択、脂質合成の誘導、および低コストのフォトバイオリアクターでの屋外大量培養。 バイオテクノロジー。 バイオエンジ。 102、100–112 (2009)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Khanra, A.、Vasistha, S.、Kumar, P.、Rai, MP 混合栄養における微細藻類の成長に対する C/N 比の役割、および経済的なバイオディーゼル用途における細胞凝集および脂質強化のためのチタン ナノ粒子の組み込み。 3 バイオテクノロジー。 10、331。https://doi.org/10.1007/s13205-020-02323-0 (2020)。

記事 PubMed PubMed Central Google Scholar

Feng、P.ら。 屋外でのクロレラ sp GN1 の成長と脂質蓄積に対する平板フォトバイオリアクターのさまざまな窒素源と光路の影響。 バイオリソース。 テクノロジー。 301、122762。https://doi.org/10.1016/j.biortech.2020.122762 (2020)。

論文 CAS PubMed Google Scholar

Tawfik、A. et al. 汚染除去、バイオ燃料、化粧品のための液体嫌気性消化物での微細藻類の培養: レビュー。 環境。 化学。 レット。 20、3631–3656 (2022)。

記事 CAS Google Scholar

ヒプキンス、MF およびベイカー、NR 分光法。 光合成、エネルギー変換: 実践的なアプローチ (Hipkins, MF および Baker, N.R 編) 51–101 (オックスフォード: IRL Press、1986)。

リファレンスをダウンロードする

本研究は、国立研究開発法人新エネルギー・産業技術総合開発機構（NEDO）の委託事業により得られた成果に基づいています。 日本の、日本の。 技術的なサポートをしていただいた大植美恵子氏、西村明子氏、山本由衣氏に感謝いたします。 山田耕司さんにも感謝します。

Algae Energy Technology Research Institute, 649-17 Nishiyama, Taki-cho, Taki-gun, Mie, 519-2171, Japan

Ranjith Kumar Bakku, Yoshimasa Yamamoto, Yu Inaba, Taro Hiranuma, Enrico Gianino, Lawi Amarianto, Waleed Mahrous & Hideyuki Suzuki

株式会社ユーグレナ 〒108-0014 東京都港区芝5-29-11 G-BASE田町2・3階

Ranjith Kumar Bakku, Yoshimasa Yamamoto, Yu Inaba, Taro Hiranuma, Enrico Gianino, Lawi Amarianto, Waleed Mahrous, Hideyuki Suzuki & Kengo Suzuki

Microalgae Production Control Technology Laboratory, RIKEN 1-7-22, Suehiro, Tsurumi, Yokohama, Kanagawa, 230-0045, Japan

Kengo Suzuki

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

PubMed Google Scholar でこの著者を検索することもできます

RKBは実験、データ解析、原稿執筆を行いました。 Y.Yはパラミロン分析を行いました。 IY、TH、EG、LA、WM は、池の準備、電気設備、サンプリング、池のメンテナンスをサポートしました。 HS と KS は実験を考案し、計画しました。 すべての著者が原稿の執筆と校正に等しく貢献しました。

Correspondence to Ranjith Kumar Bakku or Hideyuki Suzuki.

著者らは競合する利害関係を宣言していません。

シュプリンガー ネイチャーは、発行された地図および所属機関における管轄権の主張に関して中立を保ちます。

オープン アクセス この記事はクリエイティブ コモンズ表示 4.0 国際ライセンスに基づいてライセンスされており、元の著者と情報源に適切なクレジットを表示する限り、あらゆる媒体または形式での使用、共有、翻案、配布、複製が許可されます。クリエイティブ コモンズ ライセンスへのリンクを提供し、変更が加えられたかどうかを示します。 この記事内の画像またはその他のサードパーティ素材は、素材のクレジットラインに別段の記載がない限り、記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれています。 素材が記事のクリエイティブ コモンズ ライセンスに含まれておらず、意図した使用が法的規制で許可されていない場合、または許可されている使用を超えている場合は、著作権所有者から直接許可を得る必要があります。 このライセンスのコピーを表示するには、http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ にアクセスしてください。

転載と許可

Bakku、RK、山本、Y.、稲葉、Y. 他長期の半連続窒素飢餓下でのユーグレナ・グラシリスのレースウェイ栽培に関する新たな洞察。 Sci Rep 13、7123 (2023)。 https://doi.org/10.1038/s41598-023-34164-1

引用をダウンロード

受信日: 2022 年 12 月 23 日

受理日: 2023 年 4 月 25 日

公開日: 2023 年 5 月 2 日

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-023-34164-1

次のリンクを共有すると、誰でもこのコンテンツを読むことができます。

申し訳ございませんが、現在この記事の共有リンクは利用できません。

Springer Nature SharedIt コンテンツ共有イニシアチブによって提供

コメントを送信すると、利用規約とコミュニティ ガイドラインに従うことに同意したことになります。 虐待的なもの、または当社の規約やガイドラインに準拠していないものを見つけた場合は、不適切としてフラグを立ててください。